个体性反义RNA对乳腺癌细胞突变p53基因表达的特异性封闭作用

• 作者: 付丽 冯玉梅 孙玉兰 张媛媛 张彬 张霖 牛瑞芳 王亚红 许少峰
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 基因,p53 RNA,反义 DNA突变分析
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 实验病理学
• 页码范围: 544-549
• 页数: 6页
• 分类号: R73
• 字数: 5248字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0529-5807.2007.08.010

摘要

目的 研究针对p53基因突变的个体性反义RNA对乳腺癌突变p53基因的特异性封闭作用.方法 通过免疫细胞化学LSAB法染色、聚合酶链反应-单链构象多态性分析及测序确定人乳腺癌细胞系MDA-MB-231中p53突变位点,构建针对该突变点的反义表达载体并制备其反义RNA.原位杂交技术检测反义RNA与细胞内突变p53基因的特异性结合;在阳离子脂质体介导下将反义RNA转染细胞;以免疫细胞化学LSAB法染色及细胞生长抑制率观测反义RNA作用时效;Western blot检测p53蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐法检测转染细胞的生长活性;流式细胞术检测转染细胞的细胞周期分布;原位缺口末端标记法检测转染细胞的凋亡情况.结果 人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的p53第8外显子(exon8)有突变,据此位点构建反义表达载体[pGEM3zf(+/-)p53exon8].原位杂交结果显示反义RNA(ASp53exon8'RNA)在细胞质内有阳性杂交信号;于转染后48 h反义RNA封闭效果最显著,突变p53蛋白(mt-p53)的表达受抑制,细胞增殖能力下降,G2/M期阻滞.结论 针对p53基因突变位点制备的个体性反义RNA可特异性封闭乳腺癌细胞突变p53基因的表达.