转录因子E2F1抑制CREG表达调控体外培养的人血管平滑肌细胞分化

• 作者: 刘海伟 康建 张效林 徐红梅 赵昕 邓捷 闫承慧 韩雅玲
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: E2F1 转录因子 阻遏蛋白 E1A 表型 血管平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 490-496
• 页数: 7页
• 分类号: Q555.7|R34
• 字数: 4069字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2007.05.007

摘要

为探讨转录因子E2F1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化中的作用及其对E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of ElA-stimulated genes,CREG)表达调控的分子机制,应用生物信息学方法,定位人CREG(hCREG)基因启动子并确定转录因子E2F1在hCREG启动子区的结合位点,PCR方法克隆并构建hCREG基因启动子绿色荧光报告基因载体,以hCREG启动子区E2F1结合位点为模板,化学合成E2F1寡聚脱氧核苷酸(ODN)和错配E2F1 ODN,利用转录因子"诱骗(Decoy)"策略,用E2F1 ODN转染体外培养的VSMCs以阻断E2F1与hCREG基因启动子区的结合,蛋白质印迹(Western blot)分析检测阻断前后细胞内hCREG蛋白、报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和平滑肌细胞分化标志蛋白SM α-actin表达变化.结果显示:分化表型HITASY细胞中E2F1表达下调伴出核转位,而增殖表型的HITASY细胞中E2F1蛋白表达明显增加且定位于核内.进一步应用FuGene 6瞬时转染E2F1 ODN和错配E2F1 ODN于体外培养HITASY细胞中,蛋白质印迹分析发现,转染E2F1 ODN后,HITASY细胞中hCREG、SM α-actin和GFP表达均较未阻断组及错配组细胞明显增加.上述研究结果证实,E2F1是hCREG基因转录的重要调控因子,能够直接结合于hCREG启动子区阻遏hCREG表达,参与hCREG蛋白对VSMCs表型转化的调控作用.