凋亡抑制蛋白Livin两种异构体原核表达载体的构建及融合表达

• 作者: 张惠中 林芳 沈建军 邹爱民 高萍
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 凋亡抑制蛋白 Livin 凋亡 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 409-411,448
• 页数: 4页
• 分类号: Q781
• 字数: 2943字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2007.06.005

摘要

目的 构建凋亡抑制蛋白Livin两种异构体(Livinα和β)的原核细胞表达载体pET32a(+)-livinα和pET32a(+)-livinβ.方法 设计合成扩增Livin基因异构体全长cDNA序列的特异性PCR引物,以Hela细胞总RNA为模板,RT-PCR获得Livin基因异构体全长cDNA序列,用限制性内切酶Bam HⅠ和Hand Ⅲ双酶切取所需目的片段,并插入原核表达载体pET32a(+)的多克隆位点,经酶切、PCR鉴定,并经过测序证实后,构建成为Livin基因异构体表达载体(pET32a(+)-livinα、β).将重组质粒转入表达菌株BL21,诱导表达收集菌液,超声碎菌,取其上清和沉淀分别进行SDS-PAGE电泳.结果 成功获得Livinα和β全长cDNA序列,并克隆到原核表达载体pET32a(+)上;成功获得大小为55kd左右的融合蛋白.结论 Livin基因两种异构体原核表达载体的构建及其融合蛋白的制备,为进一步研究Livin异构体功能及在肿瘤细胞中的抗凋亡效应奠定了基础.此蛋白也可用于进一步抗体制备、免疫鉴定和诊断等研究.