甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆表达及鉴定

• 作者: 丁国富 周红 和生琦 李斌 王仙园 董燕 颜伟
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 青霉素结合蛋白质类 克隆,分子 基因表达 甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 烧伤感染
• 页码范围: 100-103
• 页数: 4页
• 分类号: R9
• 字数: 3123字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2007.02.007

摘要

目的 应用基因重组技术对编码甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的mecA基因片段进行克隆、表达. 方法从临床样本中分离鉴定出MRSA,根据基因文库收录的mecA基因编码序列,针对编码PBP2a第25～668位氨基酸的mecA基因片段设计引物,扩增目的基因片段,克隆至pQE30载体,经酶切鉴定、测序后,再转化E.coli M15(pREP4).采用1 mmol/L的异丙硫半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达及鉴定.结果 重组表达质粒pQE30-mecA构建成功,基因测序结果显示,扩增的mecA基因DNA片段全长为1932 bp,其中有9个碱基突变.IPTG诱导后6 h,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,M15(pQE30-mecA)出现一条相对分子质量约74×103的蛋白条带,且一部分以可溶性形式存在;M15(pQE30)未出现特异性蛋白条带.经诱导表达和鉴定证实,表达出的可溶性目的蛋白为PBP2a.结论 利用本技术可成功表达MRSA临床分离株中的可溶性PBP2a.