编码人疱疹病毒8型小衣壳蛋白开放阅读框65的原核表达及应用

• 作者: 于维林 李慧 王笑峰
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人疱疹病毒8型 衣壳蛋白质类 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 670-674
• 页数: 5页
• 分类号: R4
• 字数: 4305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1009-9158.2007.06.020

摘要

目的 构建人疱疹病毒8型(HHV8)小衣壳蛋白ORF65编码基因的原核表达载体,并进行原核表达.方法 提取BCBL-1细胞(HHV8阳性而EBV阴性)DNA,PCR技术扩增HHV8ORF65基因,目的 基因与原核表达载体pThioHis A连接后,转化宿主菌Escherichia coli BL21,异丙基硫代-D-乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,经带有6个组氨酸标签的亲和层析柱纯化获得重组抗原.重组蛋白电泳后转至聚偏氟乙烯(PVDF)膜,与HHV8阳性血清进行免疫印迹反应.对相关患者进行检测,并与美国Biotrin公司生产的HHV8 IgM和HHV8 IgG抗体间接荧光抗体试验(IFA)检测试剂盒和德国Qiagen公司ELISA检测试剂盒进行比较.结果 DNA序列分析表明目的 基因序列与HHV8标准毒株相应序列完全一致,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳可观察到相对分子质量为31 500的融合蛋白的表达,免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性.基因工程抗原的各项技术指标与Biotrin公司和Qiagen公司检测试剂盒有较好的符合率,对临床标本的检测表明该试剂盒简单、实用、结果稳定可靠.结论 HHV8重组抗原具有较好的抗原性,进一步完善后可用于HHV8抗体的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王笑峰	青岛大学医学院微生物教研室	63	179	7.0	11.0
2	李慧	青岛大学医学院附属医院检验科	128	420	10.0	14.0
3	于维林	青岛大学医学院附属医院检验科	30	107	6.0	9.0