真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达

• 作者: 张文程 朱敏生 陈杰 顾香芳 高下 麻晓峰
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Hath1 基因克隆 真核表达载体 脂质体
• 年，卷（期）: 2007,（18）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2211-2214
• 页数: 4页
• 分类号: R349.64
• 字数: 2545字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.18.011

摘要

目的 构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表迭.方法 从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoR Ⅰ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯化,前者回收1065 bp片断,后者回收大片断,再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接,转化感受态DH5α细胞,挑选单克隆,提取质粒,将所提取的质粒双酶切鉴定并测序.再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体LipofectamineTM 2000转染HEK293T细胞,观测其转染情况和目的基因的表达情况.结果 成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,该质粒能有效地转染HEK293T细胞,目的基因能有效表达.结论 pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾香芳	南京大学医学院附属南京市鼓楼医院耳鼻咽喉科	10	31	4.0	5.0
2	陈杰	南京大学医学院附属南京市鼓楼医院耳鼻咽喉科	51	239	8.0	14.0
3	高下	南京大学医学院附属南京市鼓楼医院耳鼻咽喉科	122	542	12.0	15.0
4	朱敏生	南京大学模式动物研究所	8	16	2.0	3.0
5	张文程	南京大学模式动物研究所	3	12	2.0	3.0
6	麻晓峰	南京大学医学院附属南京市鼓楼医院耳鼻咽喉科	12	22	2.0	4.0