琥珀酰辅酶A转移酶的表达纯化及抗体制备

• 作者: 张勤 朱大海
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 琥珀酰辅酶A转移酶 原核表达 抗体制备 Western印迹
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 426-429
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|R392
• 字数: 3320字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2007.03.019

摘要

目的:琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT)是酮体代谢过程中的关键限速酶,此酶缺陷多由SCOT基因突变引起,患者多有酮症酸中毒表现.为了进一步研究SCOT的功能,采用原核表达系统表达并纯化重组SCOT,制备SCOT多克隆抗体.方法:选择蛋鸡、肉鸡模式生物为研究对象,通过生物信息学对其抗原性和属间同源性进行分析,通过RT-PCR从鸡的骨骼肌cDNA中扩增了SCOT基因N端半长片段,克隆到表达载体pET28b中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组SCOT;用纯化的重组SCOT免疫小鼠后得到多克隆抗体.结果:Western印迹表明,制备的SCOT抗体具有较高的特异性,可特异性识别鸡的SCOT蛋白,同时可特异性识别小鼠和人的相应SCOT蛋白.结论:SCOT多克隆抗体的制备为后续在鸡、鼠和人中研究SCOT基因提供基础.