H5亚型禽流感灭活疫苗病毒基因的定量检测及其与HI抗体效价之间关系的分析

• 作者: 吴涛 宁宜宝 宋立 李俊平 李启红 李宁 杨承槐 王哲 王嘉 蒋桃珍 韩剑锋
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 禽流感灭活疫苗 TaqMan MGB探针 实时荧光PCR HI抗体效价
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 疫菌学
• 页码范围: 1139-1144
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5322字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0254-5101.2007.12.020

摘要

目的 建立H5亚型禽流感病毒灭活疫苗中病毒核酸的特异、敏感、快速的定量检测方法,分析其与HI抗体效价之间的相关性.探索禽流感灭活疫苗效力体外检验的方法.方法 选取H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,使用Primer Express 2.0软件设计了特异性引物和TaqMan MGB(minor groove binder)探针,利用实时荧光PCR技术来定量检测禽流感灭活疫苗,通过体外转录,制备含有选定检测序列的RNA标准品,绘制标准曲线.对50批H5亚型禽流感灭活疫苗进行了荧光定量PCR检测,测定了疫苗的HA基因拷贝数,同时测定了50批疫苗相应的HI抗体效价.进行了疫苗的HA基因拷贝数与HI抗体效价之间相关性的分析.结果 该方法的灵敏度为10拷贝/反应,标准曲线的相关系数为0.998 003,对H9亚型禽流感灭活疫苗和其他禽病疫苗无交叉反应,特异性好、重复性佳.疫苗的HA基因拷贝数与HI抗体效价不相关.结论 荧光定量PCR方法为H5亚型禽流感病毒灭活疫苗检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法.