杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5'上游序列的克隆与序列分析

• 作者: 刘红涛 宋贤瑞 李慎柯 李杰 薛乐勋 鲁照明
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 杜氏盐藻 硝酸盐还原酶 基因克隆
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 219-222
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2855字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2007.02.008

摘要

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5'上游序列,并对其进行测序和序列分析.方法:提取杜氏盐藻基因组DNA,经过BamH I、EcoR I、Hind Ⅲ、Pst I、Sal Ⅰ及Xbal Ⅰ限制性内切酶分别酶切后,再与相应接头连接,分别构建盐藻步行基因组文库BL、EL、HL、PL、SL和XL.采用巢式(LA)-PCR方法,从上述步行基因组文库中扩增杜氏盐藻NR基因5'上游序列,克隆至pMD18-T,对酶切鉴定正确的克隆进行测序.结果:从HL里扩出约1 200 bp特异性片断,回收此片段并进行T载体克隆,对阳性克隆测序.该序列的3'端与已知NR基因cDNA 5'端序列完全一致.该序列含有多个与转录调控有关的保守序列(如CAAT-box和GAGA-box),含有与EBP、EFII、NF-E1、LV 等转录因子以及广谱激活剂Oct-1结合位点相似的核苷酸序列.结论:采用LA-PCR基因组步行方法,从已知cDNA 周围未知启动子或其他调控区域中克隆得到的NR基因的5'上游区序列,可能是一种新的杜氏盐藻启动子区序列.