肠三叶因子表达载体构建及在酵母菌GS115中的表达

• 作者: 吕尚军 吴炜 孙勇 张勇 彭曦
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠三叶因子(ITF) 酵母 表达
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1124-1126,1141
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3416字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6273.2007.08.002

摘要

目的:构建肠三叶因子(ITF)的真核表达载体,并在酵母菌GS115中表达,为进一步研究ITF的生理和药理功能奠定基础.方法:通过RT-PCR获得ITF cDNA片断,将目的基因插入pPICZαA酵母表达载体,得到重组载体pPICZαA-ITF.经BspH I线性化后氯化锂转化进入GS115,Zeocin筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因.阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tricine SDS-PAGE分析及Western blot检测表达蛋白.结果:经测序及PCR证实ITF cDNA准确插入酵母表达载体pPICZαA中.Tricine SDS-PAGE分析证明ITF的分子量约为14×103,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性.结论:成功构建了真核表达载体pPICZαA-ITF,在酵母菌GS115中表达,获得重组ITF蛋白.