活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3分子的构建及其致卵巢上皮性癌细胞凋亡的实验研究

• 作者: 宋悦 沈铿
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢肿瘤 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 846-851
• 页数: 6页
• 分类号: R9
• 字数: 5634字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0529-567x.2007.12.015

摘要

目的 构建能自我激活的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3分子,并探讨其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的致凋亡作用.方法利用基因重组技术构建活性caspase-3分子--rev-caspase-3及其重组腺病毒--Ad-rev-casp3;应用免疫组化方法、细胞计数试剂盒8、流式细胞仪和蛋白印迹法分别检测rev-caspase-3作用后卵巢癌细胞系AO细胞中活性caspae-3蛋白的表达情况、细胞存活率、凋亡率、细胞周期、caspase-3活性亚单位p17和聚(腺苷二磷酸-核糖)多聚酶(PARP)的分解产物p85的表达水平,应用透射电镜观察rev-caspase-3作用后细胞的超微结构,实时PCR技术检测细胞中凋亡相关基因的表达情况;建立卵巢癌裸鼠皮下及腹腔移植瘤模型,观测rev-caspase-3作用后裸鼠生存情况及肿瘤体积的变化.结果 Ad-rev-casp3作用后的AO细胞中显著表达活性caspase-3蛋白,细胞质明显棕染;细胞中活性caspase-3亚单位p17和PARP裂解片段p85的表达水平升高.Ad-rev-casp3以感染复数(MOI)为70作用后的AO细胞存活率为30.3%,凋亡率为40.2%.Ad-rev-casp3以MOI=10作用后的细胞凋亡率只为3.4%,但此时S期细胞比例高达56.5%,G1期比例下降至9.8%,与未感染Ad-rev-casp3(MOI=0)的AO细胞的S期和G1期比例显著不同(P均＜0.05).Ad-rev-casp3作用后的AO细胞呈现显著的凋亡形态改变,电镜下见明显的凋亡小体形成;细胞中活性caspase-3基因的表达水平显著升高,为9.44.Ad-rev-casp3能显著延长荷瘤裸鼠的生存期,平均生存时间为(213±16)d,并显著抑制移植瘤的生长,在第1次注射后53 d时抑瘤率为70%.结论 表达rev-caspase-3的重组腺病毒载体对卵巢癌细胞有强烈的致凋亡作用,并可显著延长荷瘤裸鼠的生存期,抑制肿瘤生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈铿	中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科	100	1431	16.0	36.0
2	宋悦	中国医科大学附属盛京医院妇产科	20	49	4.0	6.0