Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 信洪一 朱德康 杨苗 汪铭书 程安春 袁桂萍 贾仁勇 郭宇飞 陈孝跃 陈海军
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒 RT-PCR 检测 应用
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 38-42
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 4926字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2007.01.011

摘要

根据获得的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHVⅠ)RNA聚合酶基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计了1对引物,建立了检测DHV I的RT-PCR方法.该法能从DHV Ⅰ中扩增到440 bp的条带,而对正常鸭胚尿囊液、健康鸭肝、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、雏鹅新型病毒性肠炎病毒、禽流感病毒(H5N2亚型)、鸭病毒性肿头出血症病毒、鸭源多杀性巴氏杆菌(5∶A)的扩增结果均为阴性.该法最低可以检测到30 Pg的DHV Ⅰ核酸模板.RT-PCR对DHV Ⅰ强毒CHv-1株人工感染发病死亡鸭肝的检测结果与病毒分离和Dot-ELISA检测结果的阳性检出率均为100%,对脾、肺、脑病料的检出率显著(P≤0.01)高于病毒分离和Dot-ELISA.RT-PCR、病毒分离和Dot-ELISA对1987～2005年采集且保存于-20℃的经病毒分离已确诊为鸭肝炎的临床送检肝病料的检出率分别为100%(19/19)、36.84%(7/19)和57.98%(11/19),对2000～2005年采集且于-20℃保存的来源于中国18个省份发病鸭群的48份肝病料的检出率分别为100%(48/48)、56.25%(27/48)和75.00%(36/48).结果表明,建立的RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于DHV工的分离鉴定、临床病料的检测和分子流行病学调查.