人吲哚胺2,3-双加氧酶多克隆抗体的制备

• 作者: 刘鹏 杜军 欧雪玲 谢白露
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 吲哚胺2,3-双加氧酶 多克隆抗体 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 329-332
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 4110字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2007.03.022

摘要

背景与目的:吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是一种哺乳动物细胞质中的血红素蛋白,是催化色氨酸沿犬尿氨酸途径代谢的限速酶.它的表达不仅能抑制病原微生物的生长,还能抑制T细胞的应答,从而介导肿瘤免疫耐受.本研究的目的是表达和纯化His-hIDO融合蛋白,制备兔抗人IDO多克隆抗体,并用此抗体检测IDO在肿瘤细胞中的表达.方法:将编码人IDO全长cDNA克隆入pET30a(+),测序鉴定表达载体pET30a(+)-hIDO,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白His-hIDO;用纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗人IDO多克隆抗体;用Western blot检测该多克隆抗体与重组蛋白His-hIDO的反应性,并用该抗体分析表皮癌细胞A431和肝癌细胞HepG2经IFN-γ诱导前后的IDO表达情况.结果:His-hIDO融合蛋白可与抗His多克隆抗体特异性结合;兔抗人IDO多克隆抗体的效价高,特异性好,能检测肿瘤细胞经IFN-γ诱导后的IDO的表达.结论:兔抗人IDO多克隆抗体能够有效地识别体外表达的IDO蛋白,为研究IDO在肿瘤免疫耐受中的作用提供有力工具.