多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征

• 作者: GAO Bin JIA Xing-Yuan LEI Zhen LIU Jing-Zhong WANG Zhan-Yong WU Yan XIAO Bai YAN Mei YUAN Hai-Xin 王立荣 邹起练 钮淑兰 黄尚志
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 医学
• 关键词: 唐氏综合征 荧光定量PCR 相对定量 △CT值 永生细胞系
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 934-938
• 页数: 5页
• 分类号: R5
• 字数: 4288字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.2007.08.006

摘要

为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增.以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人.采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品.通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3～300 ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30 ng/μL时,变异系数最小(＜10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%.运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90～-1.30,患者的△CT值范围是-2.95～-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P＜0.001).唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的.因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的.