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Lactoferricin B基因与几种变异克隆的构建及其在酿酒酵母中的表达与鉴定
Lactoferricin B基因与几种变异克隆的构建及其在酿酒酵母中的表达与鉴定
作者:
冯永潜
查晓军
翟朝阳
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
抗菌肽
乳铁蛋白B
基因序列变异
酵母表达
摘要:
目的 构建牛乳铁多肽(Lactoferricin B)的真核表达质粒pYES2/Lactoferricin B,实现其在酿酒酵母S.cerevisiae中的表达,并初步检测其不同变异的体外抗菌活性.方法 通过分别合成Lactoferricin B基因两条单链的部分序列,让其互为模板、引物进行PCR扩增,得到Lactoferricin B与3种变异的基因序列.将它们克隆到穿梭质粒pYES2中,构建pYES2/Lactoferricin B 及3种变异基因重组质粒,转化到大肠杆菌Top10中,让其大量增殖.提取重组质粒经纯化后将其转化到S.cerevisiae中,通过营养缺陷型筛选获得重组酵母菌并通过半乳糖诱导使其表达目的蛋白.经离子交换柱纯化收集目的蛋白后,通过体外抑菌实验比较Lactoferricin B及3种变异重组蛋白的抗菌活性.结果 经PCR扩增检验、DNA测序表明成功构建pYES2/Lactoferricin B与3种变异基因重组质粒.提取诱导后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及质谱检测,证实目的蛋白的存在,相对分子质量约为3.4×103.在大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌的抑菌实验中观测到Lactoferricin B和A17-Lactoferricin B产生了抑菌圈.结论 成功构建pYES2/Lactoferricin B及变异基因重组质粒,该重组质粒能在S.cerevisiae中诱导表达目的蛋白,为进一步研究其生物功能及抗菌活性奠定了基础.
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文献信息
篇名
Lactoferricin B基因与几种变异克隆的构建及其在酿酒酵母中的表达与鉴定
来源期刊
四川大学学报(医学版)
学科
生物学
关键词
抗菌肽
乳铁蛋白B
基因序列变异
酵母表达
年,卷(期)
2007,(4)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
578-582
页数
5页
分类号
Q78
字数
4467字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1672-173X.2007.04.005
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
翟朝阳
四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室
19
188
7.0
13.0
2
冯永潜
四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室
1
15
1.0
1.0
3
查晓军
四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室
2
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传播情况
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2020(3)
引证文献(0)
二级引证文献(3)
研究主题发展历程
节点文献
抗菌肽
乳铁蛋白B
基因序列变异
酵母表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
四川大学学报(医学版)
主办单位:
四川大学
出版周期:
双月刊
ISSN:
1672-173X
CN:
51-1644/R
开本:
大16开
出版地:
成都市人民南路三段17号
邮发代号:
62-72
创刊时间:
1959
语种:
chi
出版文献量(篇)
5493
总下载数(次)
8
总被引数(次)
35558
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四川大学学报(医学版)2007年第5期
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