葡萄糖神经酰胺合成酶siRNA表达载体的构建

• 作者: 乐晓萍 周慧聪 夏彬 张艳 张钦宪 陈辉 陈香红
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄糖神经酰胺合成酶 siRNA 表达载体 胃肿瘤
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 467-470
• 页数: 4页
• 分类号: R285.5
• 字数: 2508字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2007.03.028

摘要

目的:构建针对葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)mRNA的siRNA表达载体,并观察其对转染细胞中GCS表达的影响.方法:根据人GCS mRNA编码序列,设计并合成3对针对GCS的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入pSUPER EGFP载体重组构建RNAi质粒,进行双酶切及测序鉴定.重组质粒用脂质体包裹转染入SGC7901/VCR细胞,采用RT-PCR检测GCS mRNA表达水平的变化.结果:重组构建的载体经酶切鉴定与测序分析,显示特定位点靶序列与设计序列完全一致.转染SGC7901/VCR细胞后,GCS mRNA表达明显降低.结论:GCSsiRNA表达载体构建成功,并可有效抑制人胃癌耐药SGC7901/VCR细胞中GCS的表达,为后续研究及肿瘤的基因治疗奠定了基础.