摘要:
就小鼠卵母细胞的卵龄对克隆胚的体外发育能力的影响进行了检测,以确定最佳的取卵时间,以及取卵后进行核移植操作的可耐受的时间.采用PMSG和hCG超排B6D2F1雌鼠.在体内老化实验中,分别于注射hCG后13,15,17,20 h取卵用于核移植操作;在体外老化实验中,所有的卵均于注射hCG后13 h取出并培养,然后在13,15,17,20 h进行核移植操作.每个时间点的核移植操作在1 h内完成,重构的胚胎培养1 h后进行激活.结果显示:在体内老化实验中,注射hCG后13 h取卵,获得的克隆囊胚发育率最高,为56.0%,15 h取卵仍维持了其支持胚胎体外发育的能力,但17 h及更长时间后取的卵,重构后的囊胚发育率显著下降(18.1%).注射hCG后15 h取的卵孤雌发育率最高(囊胚发育率为90.1%),并在17 h仍维持较高的孤雌发育能力,在20 h显著下降.在体外老化试验中,于注射hCG后13 h取卵,分别于13,15,17 h重构,都获得了较高的囊胚发育率(分别为57.7%,52.2%,46.3%),而在注射hCG后20 h重构,囊胚发育率显著下降(14.8%).体外老化的孤雌胚在注射hCG后22 h激活时囊胚发育率显著下降.结果表明:卵母细胞在体内和体外老化都影响克隆胚的体外发育,最佳取卵时间为注射hCG后13 h,取卵后立即用于重构可获得最佳囊胚发育率;体内、外老化卵支持重构胚较好发育的时间间隔是不同的,体内老化卵支持重构胚发育能力从注射hCG后17 h开始下降,体外老化卵则发生在20 h.这些结果可以指导操作,有利于在应用核移植进行其他基础研究时降低操作引起的误差.