人骨形成蛋白7基因重组2型腺相关病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

• 作者: 原向伟 康焱 廖威明 张珑涓 盛璞义 雷磊 黄保丁
• 来源期刊: 中华外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓祖代细胞 中胚层 人骨形成蛋白 腺相关病毒
• 年，卷（期）: 2007,（18）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1279-1283
• 页数: 5页
• 分类号: R6
• 字数: 4723字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0529-5815.2007.18.018

摘要

目的 构建人骨形成蛋白7基因(hBMP7)重组腺相关病毒载体,并观察其在兔骨髓间充质干细胞中的表达.方法 将骨形成蛋白7基因片段克隆入穿梭质粒pUC18获得重组质粒pUC18-hBMP7.Kpn Ⅰ和Sa Ⅱ双酶切质粒pUC18-hBMP7与pSNAV,用T4DNA连接酶连接分别回收的两片段后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得重组质粒PSNAV-hBMP7,转染BHK-21细胞,筛选培养,用能表达Rap和Cap的重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2感染此细胞,裂解细胞收获病毒液.采用氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提法分离浓缩、纯化与测定病毒滴度.用rAAV2-hBMP7和rAAV2-EGFP在体外分别转染兔骨髓间充质干细胞.流式细胞仪、RT-PCR和Western-blot方法检测兔骨髓间充质干细胞中hBMP-7基因的转录和表达.结果 成功构建具有感染活性的重组腺相关病毒载体rAAV2-hBMP7,病毒载体对兔骨髓间充质干细胞早期转染效率可达99.8%,hBMP7在兔骨髓间充质干细胞中可得到转录和表达.结论 成功构建了人骨形成蛋白7基因重组腺相关病毒载体,rAAV2-hBMP7载体在体外可转染兔骨髓间充质干细胞,并获得较高的转染效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖威明	中山大学附属第一医院骨科	148	822	14.0	19.0
2	盛璞义	中山大学附属第一医院骨科	35	202	9.0	13.0
3	康焱	中山大学附属第一医院骨科	35	154	8.0	11.0
4	雷磊	中山大学附属第一医院骨科	9	63	5.0	7.0
5	张珑涓	中山大学附属第一医院骨科	15	84	6.0	8.0
6	原向伟	中山大学附属第一医院骨科	20	34	3.0	4.0
7	黄保丁	中山大学附属第一医院骨科	9	20	3.0	3.0