摘要:
背景:护骨素是一种由成骨细胞表达的蛋白,可抑制破骨细胞分化和活化.目的:观察比较17β-雌二醇与孕激素对人成骨细胞护骨素基因表达的调控作用.设计:对比观察.单位:中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所.材料:Ⅳ型胶原酶(Sigma公司),胎牛血清(Gibico公司),MEM(Sigma公司),骨钙素放射免疫法测定试剂盒(Dia2Sorin公司).方法:实验于2003-01/2006-03在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所完成.采用正常人髂前上棘松质骨进行成骨细胞的提取和培养,人成骨细胞用17β-雌二醇与孕酮干预,采用Northern杂交检测护骨素mRNA表达及酶联免疫吸附法检测护骨素蛋白质表达.主要观察指标:①人成骨细胞鉴定.②Northern杂交分析17β-雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素mRNA表达的影响.③酶联免疫吸附分析17β-雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素蛋白质分泌的影响.结果:①人成骨细胞鉴定:人成骨细胞分泌的碱性磷酸酶活性为(74.3±4.7)U/g;培养上清液中骨钙素浓度为(3.84±0.39)μg/L.表明分离培养的人成骨细胞具有成骨细胞的特性.②Northern杂交分析17β-雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素mRNA表达的影响:人成骨细胞对照组护骨素mRNA表达条带弱,与对照组相比,1×10-10,1×10-9,1×10-8 mol/L17β-雌二醇干预组护骨素mRNA表达条带逐渐增强;与0 h相比,干预12,24及48 h护骨素mRNA表达逐渐增强;孕酮对人成骨细胞护骨素mRNA表达无影响.③酶联免疫吸附分析17β-雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素蛋白质分泌的影响:与对照组比较,1×10-10,1×10-9,1×10-8 mol/L雌二醇组护骨素蛋白质分泌增加[(0.64±0.14),(1 27±0.26),(2.34±0.35),
(3.62±0.23)μg/L,P<0.01].与对照组相比,1×10-8 mol/L 17β-雌二醇干预12,24,48 h,护骨素蛋白质分泌增加[(0.62±0.12)比(1.30±0.30),(3.07±014),(3.50±0.33)μg/L,P<0.01].1×(10-10~10-8)mol/L孕酮干预12~48 h对成骨细胞护骨素蛋白质表达无影响(P>0.05).结论:17β-雌二醇促进人成骨细胞护骨素基因表达,孕酮对其无影响,表明雌激素与孕激素对骨代谢有不同的调节机制.