人转化铁受体基因的克隆和表达

• 作者: 刘启才 刘学文 刘立志 吕衍春 吴沛宏 崔春艳 李立 欧陕兴
• 来源期刊: 中华放射学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,细胞表面 基因表达 评价研究
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 535-538
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3573字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1005-1201.2007.05.024

摘要

目的 探讨人转化铁受体基因(hTfR)克隆和高效表达的方法及临床意义.方法 用RT-PCR法从人胚肝、肺组织中克隆hTfR基因,构建重组表达质粒pcDNA3-hTfR和pEGFP-C1-hTfR,转染人胚肾上皮HEK293细胞.用Western印迹法检测pcDNA3-hTfR转染HEK293细胞后hTfR蛋白的表达情况;用荧光显微镜和共聚焦荧光显微镜观察重组pEGFP-C1-hTfR质粒转染HEK293细胞后hTfR蛋白的表达水平及亚细胞定位.结果 经过DNA测序证实,克隆的hTfR基因为全长cDNA序列(2332 bp).Western印迹法检测到转染细胞能有效表达190×103的hTfR蛋白,荧光显微镜和共聚焦荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白(GFP)-hTfR融合蛋白主要定位于细胞膜.结论 从人胚肝、肺组织中可以成功克隆hTfR基因,该基因转染HEK293细胞后可获得hTfR蛋白的高效表达.hTfR主要定位于细胞膜.