单引物二次PCR法对重组质粒中HBV前C-C基因进行点突变的研究

• 作者: 侯俊 张敏 段学章 沈宏辉 胡燕 貌盼勇 辛绍杰
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DNA引物 聚合酶链反应 质粒 点突变
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 444-446
• 页数: 3页
• 分类号: R4
• 字数: 2534字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1009-9158.2007.04.023

摘要

目的 建立单引物二次PCR法对重组质粒中HBV前C-C基因进行4处点突变,并与传统环状突变法进行对比.方法 将变异点合成在一对互补引物中,先加入单条引物行PCR扩增,再以产物为模板,加入另一单条引物行PCR扩增.PCR产物加入Dpn Ⅰ酶,切除其中变异前的模板质粒,转化入大肠埃希菌DH5α,卡那霉素培养基筛选阳性菌落增菌测序.结果 对该质粒而言,采用单引物二次PCR法预期位点均发生变异,成功率高于传统环状突变法.4个变异后质粒与模板条带位置基本一致,4个质粒的拟变异位点均如预期变异成功,而其他氨基酸无变异.结论 单引物二次PCR法进行重组质粒基因突变较传统环状突变法成功率有所提高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段学章	解放军第三○二医院病毒研究所	33	268	7.0	15.0
2	胡燕	解放军第三○二医院病毒研究所	54	165	8.0	10.0
3	貌盼勇	解放军第三○二医院病毒研究所	51	188	8.0	10.0
4	辛绍杰	解放军第三○二医院病毒研究所	103	831	15.0	25.0
5	侯俊	解放军第三○二医院病毒研究所	42	127	6.0	9.0
6	张敏	解放军第三○二医院病毒研究所	95	289	9.0	13.0
7	沈宏辉	解放军第三○二医院病毒研究所	24	147	6.0	11.0