人天冬酰胺合成酶基因克隆和单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 勇威本 张青云 易玲
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗体,单克隆 天冬酰胺合成酶 基因
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 72-76
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 字数: 3942字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2007.01.024

摘要

目的 克隆人天冬酰胺合成酶(ASNS)基因,以基因工程技术表达ASNS融合蛋白,免疫动物,制备及鉴定鼠抗人ASNS的单克隆抗体,为深入研究L-天冬酰胺酶治疗中线鼻型自然杀伤细胞(NK)/T细胞淋巴瘤的机制奠定基础.方法 用逆转录(RT)-PCR从人肝癌细胞株HepG2扩增目的片段,构建原核表达质粒pMS-ASNS,在大肠杆菌中表达融合蛋白MS2-ASNS.用纯化融合蛋白免疫雌性BALB/C小鼠,以常规杂交瘤技术制备鼠抗人ASNS单克隆抗体(ASNS McAb).进行抗体亚类测定和免疫印迹法(WB)分析,然后用免疫化学技术检测ASNS在肿瘤中的表达.结果克隆ASNS读码框的部分基因(NCBI和M27396,179～1 420 bp),PCR产物为1 263 bp.融合蛋白MS2-ASNS相对分子质量约为54 700.筛选出2株能持续分泌抗ASNS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚类均为IgG2a.WB结果显示,抗ASNS单抗可与融合蛋白及细胞内ASNS蛋白特异性结合.免疫组织化学及免疫细胞化学证明,所得抗体能检测到肿瘤细胞中ASNS基因表达.结论 成功克隆了ASNS基因,并制备和鉴定了鼠抗人ASNS McAb,为深入研究L-天冬酰胺酶用于治疗中线鼻型NK/T细胞淋巴瘤的机制提供了工具.