AMP激活的蛋白激酶α2亚基在大肠杆菌中的克隆及表达

• 作者: 符庆瑛 高钰琪
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: AMP激活的蛋白激酶 大肠杆菌 基因克隆 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1772-1775,1764
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6273.2007.12.004

摘要

目的:AMP激活的蛋白激酶(AMPK)在脑内作为多功能能量感受器发挥作用,主要协调代谢和能量的需要.脑神经元中AMPKα2亚基的含量明显高于α1亚基,本研究选择α2亚基作为对象,研究其在大肠杆菌中的表达情况,为以蛋白原核表达为前提的研究技术的应用提供实验依据.方法:大鼠AMPKα2蛋白编码区片段通过PCR方法从重组pcDNA3质粒中扩增后,克隆至带有λcI基因的pBT载体,构建融合表达载体pBT-AMPKα2.通过核苷酸序列测定证实结果正确后,转化pBT-AMPKα2入大肠杆菌XL-1 Blue MR菌株,IPTG诱导目的蛋白表达.结果:Western blotting显示AMPKα2-λcI融合蛋白表达,分子量约为89ku,与预期相符合.结果还表明AMPKα2-λcI融合蛋白以可溶性蛋白和不溶性包涵体两种形式存在,前者不稳定易发生降解,生成AMPKα2和λcI蛋白,分子量分别是62ku和27ku;后者稳定不发生降解.结论:AMPKα2亚基能以AMPKα2-λcI融合蛋白的形式在大肠杆菌中表达,这为今后以pBT-AMPKα2融合表达载体为工具利用大肠杆菌双杂交系统筛选AMPKα2的相互作用蛋白奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高钰琪	第三军医大学病理生理学与高原生理学教研室军队高原生理与高原病研究重点实验室	131	795	13.0	19.0
2	符庆瑛	第三军医大学病理生理学与高原生理学教研室军队高原生理与高原病研究重点实验室	2	10	1.0	2.0