SEREX方法鉴定CTCL细胞肿瘤抗原

• 作者: 李方 王字玲
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 淋巴瘤 SEREX 抗体,多克隆 抗原,肿瘤
• 年，卷（期）: 2007,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1057-1060
• 页数: 4页
• 分类号: R730.3
• 字数: 4471字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2007.10.017

摘要

目的 分离纯化皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞系SeAx细胞膜蛋白并制备多克隆抗体.利用SEREX法从SeAx cDNA噬菌体表达文库中筛选肿瘤抗原.方法 培养SeAx细胞至2×1010个,用组织匀浆器匀浆后差速离心法分离细胞各组分,富集细胞膜抗原.用细胞器特异性抗体对纯化步骤中的各组分进行检测.用膜蛋白组分免疫家兔4次,每次免疫后用ELISA法测定血清抗体滴度.4次免疫后用Western blot方法测定多抗与SeAx细胞各组分蛋白反应的特异性.重组噬菌体感染大肠杆菌,将表达的重组蛋白转印到硝酸纤维素膜上,与SeAx细胞膜蛋白免疫的兔血清进行反应,阳性的克隆测定核苷酸序列,通过数据库搜索比较确定基因.结果 用差速离心法得到SeAx细胞膜蛋白,免疫家兔4次后获得了效价为1×10-5的多克隆抗体.共筛选了1×106个噬菌体克隆,得到25个阳性克隆,经核苷酸序列测定和数据库分析,其中4个cDNA片段为膜蛋白成分,分别为integrin alpha 4,ligatin,matrix metalloproteinase 24和MHC-I molecule HLA-A.结论 分离并纯化了CTCL细胞系SeAx细胞膜蛋白,成功制备了多克隆抗体,用SEREX方法从SeAx mRNA建立的cDNA噬菌体表达文库中筛选到4个肿瘤细胞膜蛋白基因,它们可以引起机体产生体液免疫反应,并可能成为潜在的免疫治疗靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李方	解放军总医院肿瘤科	48	273	9.0	14.0
2	王字玲	军事医学科学院野战输血研究所	47	218	8.0	11.0