人原发型肝癌组织cDNA文库的构建

• 作者: 傅思源 刘辉 吴东 吴孟超 周伟平 张阳德 李爱军 李钧 潘泽亚 邱应和 陆炯炯
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: cDNA文库 原发型肝癌 肿瘤抗原
• 年，卷（期）: 2007,（21）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2621-2624
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 字数: 3298字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.21.017

摘要

目的 快速构建混合人原发型肝癌组织cDNA文库.方法 从混合人原发型肝癌组织分离总RNA,以含有sfiIB酶切位点的oligo(dT)引物合成第1链cDNA,以含sfiIA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA,双链cDNA经sfiI(IA & IB)酶切,以CHROMA SPIN-400柱分级分离cDNA,收集符合需要的cDNA片段并纯化,随后将之与λTriplEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库.结果 经检测共获得3.96×106个重组子,重组率＞93%,文库经扩增后滴度为3.92×109 pfu/ml.结论 用SMART方法构建的原发型肝癌组织cDNA文库质量较高,为以后筛选获取原发型肝癌特异抗原基因或其他相关基因奠定了基础.