摘要:
目的:观察聚乙二醇法在组织工程瓣膜准备中的应用价值,比较聚乙二醇去细胞前后组织工程瓣膜的物理特性.方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学系实验室完成.①实验分组:取猪10只,由于猪主动脉瓣为三叶瓣结构,共取得瓣叶组织30个,麻醉后宰杀取其心脏动脉瓣膜,分为去细胞组和对照组,每组各15个.②实验方法:去细胞组用聚乙二醇和DNase Ⅰ处理;瓣叶组织放入1 kg/L聚乙二醇,室温下浸泡30~45 min,振荡器加以振荡;含抗生素磷酸盐缓冲液浸泡24 h,反复3次洗脱;以5×104 U/L DNase Ⅰ液浸泡处理1 h;对照组仅以含抗生素磷酸盐缓冲液浸泡24 h,反复3次洗脱.③实验评估:苏木精-伊红染色、扫描电镜观察去细胞情况,吸光度(A)值,计算去细胞率(%)=(对照组A值-去细胞组A值)/对照组A值×100%.猪去细胞瓣膜条置于力学测试仪测定最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量.结果:纳入猪10只,均进入结果分析.①去细胞组织形态学观察:去细胞组猪瓣膜组织中看不到细胞成分,且细胞外基质结构保存完整,胶原纤维排列整齐,无明显断裂,仍呈波浪状平行排列,结构紧凑,弹性纤维结构清晰,组织无明显水肿.②DNA含量分析:聚乙二醇处理后去细胞百分率为95.32%.③生物力学检测:与对照组比较,去细胞组瓣膜组织最大负荷[(12.586±1.693),(10.242±1.435)N,P>0.05]、最大应力[(2.346±0.342),(1.877±0.572)N/mm,P>0.05]、弹性模量(15.152±1.579,14.549±0.678,P>0.05)、最大应变[(31.685±7.533),(28.118±6.045)mm/N,P>0.05]等均无显著差异.结论:聚乙二醇法去除细胞完全,细胞外基质保存完整,对组织机械性能无明显影响,适于构建组织工程瓣膜.