siRNA沉默细胞周期蛋白A2基因对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用

• 作者: 丁佳逸 刘叶 沈炜亮 范顺武 赵兴
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨肉瘤 RNA 细胞周期蛋白A
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 627-633
• 页数: 7页
• 分类号: R73
• 字数: 5994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2007.09.013

摘要

目的 研究siRNA对骨肉瘤MG-63细胞株及正常成纤维细胞细胞周期蛋白cyclin A2基因表达的抑制及对细胞增殖的影响.方法 设计并化学合成靶向cyclinA2基因的siRNA,用oligofectamine将其转染到骨肉瘤细胞系MG-63及正常人成纤维细胞(HSF)中,用无义siRNA转染作为阴性对照,以单加缓冲液磷酸盐缓冲液(PBS)作为空白对照,实时-聚合酶链反应(PCR)、Western印迹方法检测cyclinA2基因沉默效果,采用MTT、RT-PCR、流式细胞、平板克隆培养等方法评价cyclinA2基因表达后被抑制后细胞的生长状态,同时检测细胞PCNA及cyclinB1基因表达的改变.结果 1、10、50、100 nmol/L浓度的cyclinA2-siRNA分别使MG-63细胞cyclinA2基因表达降低了9.4%,56.4%,79.2%和84.3%,同时cyclinA2蛋白表达也相应降低.转染10 nmol/L及50 nmol/L siRNA后48 h,MG-63细胞增殖抑制分别达到39.1%及54.9%,细胞周期阻滞于G0/G1期,平板克隆形成率降低,细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)及cyclinB1的mRNA表达水平明显下降.对正常成纤维细胞HSF,50 nmol/L cyclinA2-siRNA可抑制58.1%的cyclinA2基因及蛋白表达,其导致细胞周期出现轻度改变,但细胞的增殖及平板克隆形成能力未受影响.结论 cyclinA2是肿瘤细胞增殖所依赖的关键基因,针对cyclinA2基因的siRNA能有效降低细胞中cyclinA2 mRNA及蛋白的表达,其能抑制骨肉瘤细胞的生长而对正常细胞的增殖影响很小,靶向cyclinA2的siRNA有望成为治疗骨肉瘤的新途径.