摘要:
背景:肺缺血再灌注损伤过程中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化及其可能的作用机制有待观察.目的:观察大鼠肺缺血再灌注损伤中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化,并分析细胞凋亡在肺缺血再灌注损伤中作用及可能机制.设计:随机对照动物实验.单位:南京医科大学附属南京第一医院急诊中心.材料:实验于2006-04/2006-09在南京医科大学附属南京第一医院动物实验室及南京市放射免疫检测中心完成.选用28只雄性健康清洁级SD大鼠,体质量250~350 g,鼠龄49~76 d,由南京医科大学实验动物中心提供.随机数字表法将大鼠分为实验组及对照组,每组14只.方法:①实验干预:实验组大鼠参照Eppinger等的方法进行建立肺缺血再灌注模型,大鼠给予阻断肺门45 min(观察肺无舒缩为阻断标准),再开放3,6 h(再灌注以肺恢复舒缩为标准)后取材,每次取7只,对照组仪行开胸术,于相同时间点同样方法分离肺组织.②实验评估:采用Annexin-V-PI双染法通过流式细胞仪检测肺组织凋亡细胞,计算凋亡率;采用免疫组织化学法及图像分析法观察肺脏天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达;计算2组大鼠左肺湿干质量比;计算肺泡损伤数比值进行肺组织损伤定量评价;光镜下苏木精-伊红染色观察肺脏的病理形态学变化.主要观察指标:①肺组织细胞凋亡率及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达.②肺湿干质量比及肺组织损伤定量评价结果.③肺组织病理形态学变化.结果:纳入大鼠28只均进入结果分析,无脱落.①实验组肺缺血再灌注3,6 h肺组织细胞凋亡率较对照组有明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),实验组缺血再灌注6 h凋亡率较3 h有所降低(P<0.05).②实验组大鼠肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达3 h达到最高,6 h稍有下降,较对照组各时间点表达增加(P<0.01).③实验组肺缺血再灌注3,6 h肺泡损伤数比值及肺脏湿干质量比值较对照组均明显增加(P<0.01).实验组缺血再灌注6 h两比值较3 h有所增加(P<0.05).④实验组肺泡结构破坏、塌陷、消失,肺泡间隔有大量的炎性细胞浸润,肺缺血再灌注6 h较3 h更严重.对照组无明显改变.结论:肺缺血再灌注早期可能通过天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的改变,激活细胞的凋亡途径,诱导肺组织细胞凋亡的发生,从而导致肺损伤的发生.