摘要:
目的:适当的碱性成纤维细胞生长因子剂量能促进脂质过氧化活性,发挥保护脊髓神经细胞的功能.设立不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子,比较其对大鼠胚胎脊髓神经细胞生长发育和脂质过氧化的影响,筛选出保护脊髓损伤的机会窗口.方法:实验于2006-08/10在江苏大学医学技术学院细胞培养室完成.①实验方法:健康成年妊娠16 d的Wistar孕鼠1只,取出胚胎脱颈椎法处死,分离脊髓组织胰蛋白酶消化,制备细胞悬液,将脊髓神经细胞密度调整至4×105L-1.碱性成纤维细胞生长因子组分别向细胞悬液中加入1,10,50,100,200μg/L碱性成纤维细胞生长因子20 μL,设立正常对照组.②实验评估:倒置相差显微镜下观察胚胎脊髓神经细胞形态,计数集落数,确定细胞分化的结果.检测超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量及相对蛋白质含量.结果:①胚胎脊髓神经细胞的形态:刚接种的脊髓神经细胞为圆形,随着培养的时间延长胞体逐渐增大,伸出突起的脊髓神经细胞逐渐增多、突起伸长.培养5~8 d的脊髓神经细胞胞体最丰满,周围晕光明显,随后大量脊髓神经细胞增殖形成细胞岛.②鼠胚胎脊髓神经细胞的生长分化:与正常对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子10,50,100 μg/L组细胞集落数明显增加(P<0.05);至200 μg/L时细胞集落数减少(P<0.01),细胞存活率明显下降,甚至出现细胞死亡现象.③鼠胚胎脊髓神经细胞相对蛋白质含量:与正常对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子10,50,100 μg/L组可明显提高鼠胚胎脊髓神经细胞相对蛋白质含量(P<0.05);至200 μg/L时则产生抑制作用(P<0.01).④鼠胚胎脊髓神经细胞抗氧化指标检测:与正常对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子10,50,100 μg/L组超氧化物歧化酶活性升高,丙二醛含量降低(P<0.05);至200 μg/L时丙二醛含量明显升高(P<0.01).结论:10~100 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子能促进鼠胚胎脊髓神经细胞的生长发育,增加细胞突起长度,调节脂质过氧化水平,维持细胞内的自由基动态平衡.