小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建与鉴定

• 作者: 彭毅志 辛海明 郭浩
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 CCR7 不成熟树突状细胞
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1643-1645,1639
• 页数: 4页
• 分类号: Q456|Q784|Q813
• 字数: 3629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6273.2007.11.013

摘要

目的:构建含有小鼠趋化因子受体-7(CCR7)基因的重组腺病毒,为下一步转染不成熟树突状细胞(imDC)诱导免疫耐受研究奠定基础.方法:提取小鼠胸腺总RNA,应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,以自行设计的带有酶切位点的引物,扩增获得CCR7基因全部序列,经过T-A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,在BJ5183菌内和pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆,酶切鉴定,线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、PCR鉴定及扩增,得到含有CCR7基因的重组腺病毒,根据报告基因GFP测定病毒滴度.结果:成功构建小鼠CCR7基因重组腺病毒,病毒滴度为1×109U/mL.结论:该重组腺病毒载体的成功构建,为进一步研究携带CCR7基因的imDC的趋化迁移性等研究提供了一定的工作基础.