人外周血单核细胞来源树突状细胞转染重组腺相关病毒诱导特异性T细胞的效应

• 作者: Paul L.Hermonat Yong Liu 吴自勍 尤长宣 罗荣城 黄浩
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 树突状细胞 前列腺特异性抗原 细胞毒性T细胞
• 年，卷（期）: 2007,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 10117-10120
• 页数: 4页
• 分类号: R737.25
• 字数: 5665字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.50.034

摘要

目的:观察人外周血单核细胞来源的树突状细胞转染含前列腺特异性抗原片段的重组腺相关病毒后,其所诱导的特异性T细胞对前列腺癌细胞株LNCaP和DU145的体外杀伤抑制作用.方法:实验于2006-05/10在南方医院肿瘤科生物室完成.①对象:HLA-A2基因亚型的健康自愿供血者1名,对本实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准.作为靶细胞的前列腺癌细胞株LNCaP、DU145以及携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒由美国阿肯色大学生物治疗中心刘勇教授惠赠.②实验方法:抽取HLA表型为A2的健康自愿供血者外周血50 mL,Ficoll法分离单核细胞体外培养,磷酸盐缓冲液洗涤6孔板,收集悬浮细胞作为效应T细胞,贴壁细胞即为树突状细胞.向6孔板内加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒,第4天加入白细胞介素4,第6天加入肿瘤坏死因子α,至培养第7天收获悬浮细胞即为成熟的树突状细胞.③实验评估:应用流式细胞仪检测树突状细胞表面分子标记的表达.以ELISA法检测树突状细胞分泌白细胞介素12的含量.将成熟树突状细胞与效应T细胞分别按1:10、1:20、1:40进行共培养,将未经过树突状细胞共育的T细胞设置为空白对照组,ELISA法检测效应T细胞分泌干扰素γ的含量.LNCaP、DU145靶细胞分别与效应T细胞按效靶比5:1、10:1、20:1、40:1进行共培养,MTT法检测效应T细胞对两种靶细胞的杀伤作用.结果:①树突状细胞表面分子标记的表达:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒致敏后的树突状细胞,培养8 d后高表达CD83,CD40,HLA-DR,CD80,CD1a,CD86,分别为65.8%,66.0%,96.7%,70.0%,61.9%,79.0%.②树突状细胞释放白细胞介素12含量检测:与培养第1天比较,第7天成熟树突状细胞释放白细胞介素12的含量显著升高(P＜0.05).③效应T细胞释放干扰素γ含量检测:与空白对照组比较,树突状细胞:T细胞按1:10、1:20、1:40共培养后所释放的干扰素γ含量均明显升高(P＜0.01,0.01,0.05),且随树突状细胞加入比例的提高有所增加.④效应T细胞的细胞毒性作用检测:效应T细胞可有效识别并杀伤HLA-A2阳性的LNCaP细胞,其抑制作用在效靶比为10:1、20:1、40:1时均显著强于DU145细胞株(P＜0.01).结论:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒转染后的树突状细胞,其细胞表型和刺激淋巴细胞增殖、分化的功能无明显改变,可诱导自体效应T细胞增殖,该效应T细胞对LNCaP细胞具有明显杀伤作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗荣城	南方医科大学附属南方医院肿瘤中心	287	1892	18.0	29.0
2	黄浩	南方医科大学附属南方医院肿瘤中心	38	123	6.0	9.0
3	吴自勍	南方医科大学附属南方医院肿瘤中心	14	35	3.0	5.0
4	尤长宣	南方医科大学附属南方医院肿瘤中心	49	190	7.0	12.0
5	Yong Liu	南方医科大学附属南方医院肿瘤中心	4	3	1.0	1.0
6	Paul L.Hermonat	南方医科大学附属南方医院肿瘤中心	4	3	1.0	1.0