不同浓度重组人骨形成蛋白2和碱性成纤维生长因子对犬骨髓基质细胞的生物学作用

• 作者: 张秀丽 潘可风 王磊 黄远亮
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓基质细胞 重组人骨形成蛋白2 碱性成纤维细胞生长因子
• 年，卷（期）: 2007,（46）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 9276-9280
• 页数: 5页
• 分类号: R329.2
• 字数: 6926字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.46.012

摘要

目的:骨形成过程由骨形成蛋白诱导开始,并受到多种生长因子的综合调控.为建立良好的细胞培养体系和配制含有多种生长因子的活性材料,现察不同浓度的重组人骨形成蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子对犬骨髓基质细胞增殖、成骨分化的影响.方法:实验于2007-05/07在上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔生物工程实验室完成.①实验材料:1岁beagle犬3只.重组骨形成蛋白2,碱性成纤维细胞生长因子(Peprotech).②实验方法:犬肌注麻醉后,穿刺抽取2 mL骨髓,离心制备骨髓基质细胞,进行原代培养.待细胞80%汇合时,胰酶+乙二胺四乙酸消化传代.③实验评估:取传至第3代的细胞,接种后分别加入重组骨形成蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,各自分为0,25,50,100,200 μg/L组.于第1,2,3,4,5,6天倒置显微镜下动态观察细胞形态;MTT比色法测定细胞增殖水平;碱性磷酸酶活性定量检测细胞成骨分化情况;于第6天行Von Kossa及碱性磷酸酶染色.结果:①细胞形态观察:第3代骨髓基质细胞诱导培养3 d后,多角形细胞增多,细胞逐渐向梭形或多边形转化,胞体膨大,存在大小形态不一的胞浆突起,胞核较大,位于细胞体一侧,偶见2个核仁;约6 d细胞融合,仍以长梭形或线形为主,集落生长趋势明显.②细胞增殖测定:与空白对照组比较,100,200μg/L重组骨形成蛋白2能显著促进骨髓基质细胞生长,且浓度为100μg/L时随作用时间的延长细胞生长速度增加尤为明显(P＜0.01);50μg/L碱性成纤维细胞生长因子能显著促进骨髓基质细胞生长(P＜0.05).③细胞成骨分化测定:与空白对照组比较,25 μg/L重组骨形成蛋白2能显著促进犬骨髓基质细胞分化,且随作用时间的延长细胞分化尤为明显(P＜0.01).碱性成纤维细胞生长因子无显著促进犬骨髓基质细胞分化作用.④Von Kossa染色结果:各组均有明显钙结节形成.⑤碱性磷酸酶染色结果:各组胞质内均可见紫色颗粒,呈阳性表达.结论:100 μg/L重组人骨形成蛋白2与50 μg/L碱性成纤维细胞生长因子均能有效地促进犬骨髓基质细胞增殖,25μg/L重组人骨形成蛋白2可明显促进犬骨髓基质细胞成骨分化,为构建活性骨替代材料提供良好的实验平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄远亮	同济大学附属东方医院口腔科	93	617	13.0	19.0
2	王磊	同济大学材料科学与工程学院	374	3139	29.0	41.0
3	张秀丽	上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔生物工程实验室	24	136	8.0	10.0
4	潘可风	同济大学附属口腔医学院口腔颌面外科	80	441	11.0	15.0