流式细胞分选术和Rho123在分离MHCC97肿瘤干细胞中的应用

• 作者: 千年松 曹云新 杨安钢 胡金涛
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 流式细胞分选术 罗丹明123 肿瘤干细胞 CK-19
• 年，卷（期）: 2007,（46）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 9272-9275
• 页数: 4页
• 分类号: R732
• 字数: 4418字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.46.018

摘要

目的:肝癌组织中可能存在具有表型和功能特殊的肝癌细胞,分离和鉴定这群细胞是否具有干细胞特征对阐明肝癌发病机制、揭示肝癌复发和转移具有重要的意义.寻求分离MHCC97肿瘤干细胞的有效方法,探讨角蛋白(CK-19)在不同肝癌细胞亚群中的表达差异.方法:实验于2006-11/2007-05在解放军第四军医大学免疫实验室和肝胆外科实验室完成.细胞来源:MHCC97肝癌细胞(人高转移肝癌细胞系)由上海复旦大学中山医院肝癌研究所提供.实验方法:MHCC97细胞常规消化,HBSS洗涤,制备成单细胞悬液,细胞密度为1×109 L-1.每份取1×106个细胞,参考Rho123对线粒体膜电位测定的0.1 mg/L质量浓度,分别做0.1 mg/L和0.05 mg/L两个质量浓度细胞梯度染色,对照组加入维拉帕米(终浓度50 mmol/L),以未加Rho123作为阴性对照.实验评估:采用免疫细胞化学方法观察细胞角蛋白19在0.05 mg/L Rho123细胞及0.1 mg/L Rho123两组中的表达和含量.结果:单纯加入Rho123组有一低荧光拖尾,而维拉帕米拮抗组无此区域,即0.05 mg/L Rho123细胞占总数的2.1%,其余为0.1 mg/L Rho123组细胞.两组细胞内均有细胞角蛋白19阳性表达,阳性反应为显示位于细胞质的棕黄色颗粒,两组比较有统计学差异(P＜0.05)结论:细胞角蛋白19在肝癌细胞亚群中表达有差异,强阳性多数分布在0.05 mg/L Rho123组中,Rho123结合流式细胞分选术可以有效地分选出癌细胞中的肿瘤干细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹云新	解放军第四军医大学免疫学教研室	11	78	7.0	8.0
2	杨安钢	解放军第四军医大学免疫学教研室	3	21	2.0	3.0
3	千年松	解放军第四军医大学肝胆外科	2	17	2.0	2.0
4	胡金涛	解放军第四军医大学免疫学教研室	1	14	1.0	1.0