骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的动态观察

• 作者: 侯怀水 时庆 李栋 沈柏均 王海莲 鞠秀丽
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓 间充质干细胞 诱导分化 胰岛素分泌细胞
• 年，卷（期）: 2007,（33）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 6606-6610
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5495字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.33.003

摘要

目的:探讨体外诱导骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的可能性,并观察其动态变化.方法:实验于2005-09/2007-03在山东大学齐鲁医院完成.①标本来源:骨髓标本15例来自山东大学齐鲁医院成人骨髓检查结果正常者,均签署捐献同意书.②实验方法:无菌条件下取骨髓2.0～5.0 mL,采用percoll分离液和贴壁法获得纯化的成人骨髓间充质干细胞.③实验评估:流式细胞仪行细胞表面抗原检测,在适当的条件下诱导其分化为成骨细胞和脂肪细胞.采用两步法向胰岛素分泌细胞诱导,观察其在碱性成纤维细胞生长因子、活化素A、胰岛素样生长因子、尼克酰胺等因子刺激下向胰岛素分泌细胞分化的动态变化.双硫踪染色鉴定胰岛样细胞团,酶联免疫吸附试验检测细胞分泌胰岛素的情况,RT-PCR检测胰岛细胞特异基因的表达.结果:①骨髓间充质干细胞的生长特性及免疫表型:分离培养获得的贴壁细胞,呈形态均一的梭形,流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44表达阳性.②向成骨细胞和脂肪细胞的诱导分化:此类细胞经茜素红染色、油红O染色均呈阳性,可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞.③向胰岛素分泌细胞的诱导分化:第1步诱导后出现细胞簇,双硫腙染色不着色,胰岛素分泌量少,仅检测到PDX-1基因的表达,证实其为胰岛前体细胞.第2步诱导后细胞簇数目逐渐上升,至诱导14 d大部分细胞簇经双硫腙染色都呈红色.④诱导后培养上清中胰岛素含量:诱导第3,7,14,21天的胰岛素分泌量分别为(15.3±4.9),(34.1±5.6),(40.4±5.3),(39.8±5.1)mU/L.⑤胰岛细胞特异基因的表达:诱导7 d仅检测到PDX-1基因的表达,insulin 1、insulin 2和Glut 2基因均不表达.诱导14,21 d检测到insulin 2、PDX-1基因表达,insulin 1基因弱表达,Glut 2基因不表达.结论:体外分离、纯化得到的骨髓间充质干细胞诱导7 d可分化出胰岛前体细胞,不具功能性;诱导14 d后可成功地分化出成熟的具有功能性的胰岛素分泌细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王海莲	山东大学齐鲁医院儿科	13	40	4.0	5.0
2	沈柏均	山东大学齐鲁医院低温医学研究室	59	275	10.0	12.0
3	侯怀水	山东大学齐鲁医院低温医学研究室	37	222	9.0	12.0
4	时庆	山东大学齐鲁医院低温医学研究室	66	433	10.0	18.0
5	李栋	山东大学齐鲁医院低温医学研究室	91	330	8.0	13.0
6	鞠秀丽	山东大学齐鲁医院儿科	62	192	7.0	9.0