TOPO克隆构建SARS-CoV M蛋白基因裂殖酵母表达载体及其稳定性

• 作者: 蔡金艳 赵林 郑文岭 马文丽
• 来源期刊: 医药导报
• 学科: 医学
• 关键词: TOPO克隆 SARS-CoVM蛋白基因 表达载体构建 裂殖酵母
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 药物研究
• 页码范围: 709-713
• 页数: 5页
• 分类号: R967
• 字数: 4578字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1004-0781.2007.07.003

摘要

目的 利用TOPO克隆法构建SARS-CoV M蛋白基因的裂殖酵母重组表达载体,并验证重组载体在宿主细胞中的稳定性.方法 运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从SARS-CoV RNA中扩增出M蛋白基因,AT克隆构建出序列正确的pMD18-T-M重组载体.设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-M载体上亚克隆出M蛋白基因,与裂殖酵母表达载体pNMT1-TOPO进行TOPO克隆,构建出重组表达载体pNMT1-M,转化TOP10感受态细胞,菌落PCR鉴定阳性转化子后进行测序鉴定.将序列正确的pNMT1-M重组载体电转化入裂殖酵母TCP1菌株中,在EMM培养基中诱导表达,连续传代100代,在EMM+T培养基中验证其稳定性.结果 RT-PCR获得666 bp的片段,pMD18-T-M重组载体经测序验证序列正确;重组表达载体pNMT1-M经菌落PCR和测序鉴定均正确;重组裂殖酵母菌经诱导后,SDS-PAGE检测出了表达条带;重组表达载体连续传代后,未发现丢失现象.结论 成功地构建出了SARS-CoV M蛋白基因的裂殖酵母表达载体,验证了其在裂殖酵母中能稳定地进行遗传,为下一步的表达优化、活性和功能研究垫定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马文丽	南方医科大学基因工程研究所	275	1255	15.0	23.0
2	郑文岭		94	308	8.0	12.0
3	赵林	广东药学院生命科学与生物制药学院	21	42	4.0	5.0
4	蔡金艳	广东药学院药科学院	21	121	5.0	10.0