荧光共振能量转移技术检测ITGB4BP与P311间的相互作用

• 作者: 吴军 张小容 彭旭 易绍萱 曹红卫 罗高兴 胡晓红 袁顺宗 谭江琳 贺伟峰 陈希炜 马兵
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: ITGB4BP P311 荧光共振能量转移 蛋白相互作用
• 年，卷（期）: 2007,（16）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1555-1558
• 页数: 4页
• 分类号: Q503|Q51|Q816
• 字数: 4252字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.16.003

摘要

目的 利用激光共聚焦显微镜中的荧光共振能量转移(FRET)技术来验证整合素4结合蛋白(ITGB4BP)和P311间的相互作用.方法 分别构建能在哺乳动物细胞中表达ITGB4BP的绿色荧光融合蛋白ITGB4BP-EGFP和表达P311的红色荧光融合蛋白P311-DsRed的重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed,经酶切与测序鉴定正确后,共转染人胚肾293(HEK293)细胞48 h后,采用受体漂白方法(P311-DsRed),检测ITGB4BP和P311间的能量转移率(E)和相互间的作用距离(R).结果 重组载体pITGB4BP-EGFP和pP311-DsRed经双酶切鉴定正确,转染293细胞后经激光共聚焦显微镜观察能分别表达融合蛋白ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed,在细胞质和细胞核中存在着共定位,FRET检测结果显示其能量转移率为14%,两个分子间的作用距离为6.3 nm.结论 成功构建了ITGB4BP-EGFP和P311-DsRed融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中进行了表达后,利用FRET技术证实了活体细胞内ITGB4BP和P311间存在着相互作用.