RNA干扰沉默哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白基因表达对大鼠血管平滑肌细胞增殖活性及移植血管内膜增生的影响

• 作者: 刘程伟 张强 张志深 杨军 杨德华 胡新华
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA 基因表达 肌,平滑,血管 血管内膜 大鼠
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 58-62
• 页数: 5页
• 分类号: R9
• 字数: 3629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2007.01.016

摘要

目的 构建靶向哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的RNA干扰表达载体,研究其对离体培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及大鼠自体移植静脉内膜增生的影响.方法 设计并合成针对大鼠mTOR基因的短发夹环RNA(shRNA)序列和对照序列,插入逆转录病毒载体pLXIN,转染包装细胞获得重组的病毒载体.感染VSMC,Northern杂交和免疫蛋白印迹检测mTOR及其下游底物4E-BP1和p70s6k表达的变化,流式细胞仪检测VSMC增殖周期的变化,MTT法检测VSMC增殖活性的改变.建立大鼠自体静脉移植模型54只,随机分成转基因组、对照组、空白对照组,术后7 d、14 d、28 d取材,常规HE染色、免疫组织化学染色、免疫蛋白印迹检测mTOR表达,TUNEL法检测VSMC凋亡.结果 shRNA序列插入pLXIN载体,成功包装并且感染VSMC,证实针对mTOR基因的pLXIN-shRNA能够显著抑制mTOR表达,mTOR通路下游的p70s6k表达减少,而4E-BP1的表达却显著增加;被感染VSMC的分裂、增殖过程受阻,更多细胞停滞在G0/G1期;局部感染移植血管能够显著减少mTOR基因的mRNA及蛋白质产物表达(均P＜O.01),内膜增生程度亦较其他组明显减轻(P＜0.01),凋亡细胞增多(P＜0.01).结论 成功构建靶向mTOR基因的RNA干扰表达载体,沉默mTOR基因表达能够抑制VSMC分裂、分化和增殖,减轻内膜增生,增加VSMC凋亡.