利用腺病毒提高腺相关病毒对肿瘤细胞的转导效率

• 作者: 吴小兵 张巨峰 李惠明 王丰 王慧萍 董小岩 裘玮 陈霞芳 韦芳 黄倩
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤 基因疗法 腺病毒,人 腺相关病毒 转导
• 年，卷（期）: 2007,（28）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1987-1990
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3300字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2007.28.013

摘要

目的 探讨小量腺病毒作为辅助病毒能否增强腺相关病毒(AAV)对肿瘤细胞和裸鼠肿瘤模型的转导效率并对增强的机理进行初步探讨.方法 采用绿色荧光蛋白(EGFP)标记的AAV2联合不同滴度的非复制型腺病毒(Ad-null)感染人非小细胞肺癌细胞系(AAV2+Ad-null组),并以相同剂量的AAV2单独感染(AAV2组)作为对照.用荧光显微镜观察EGFP阳性细胞,流式细胞仪检测EGFP阳性细胞的百分率和单个细胞平均荧光强度,Western印迹检测EGFP蛋白表达的变化以比较各组病毒转导效率.换用萤光素酶(Luc)标记的AAV2,通过Luc检测系统检测两组对体外肿瘤细胞及裸鼠肿瘤模型的转导效率.荧光定量PCR检测感染后肿瘤细胞DNA及mRNA的EGFP相对拷贝数,观察Ad-null对AAV2复制及转录的影响.结果 随着Ad-null滴度的增加,AAV2+Ad-null组的肿瘤细胞EGFP阳性细胞数明显增加.流式细胞仪计数的EGFP阳性细胞率按0.01、0.1、1、10 MOI Ad-null滴度依次为10.9%,18.0%,36.2%,55.2%,明显高于AAV2组(6.4%).AAV2+10 MOI Ad-null组单个细胞的荧光强度约为AAV2组的1.32倍.各AAV2+Ad-null组EGFP在细胞中的蛋白表达水平也均高于AAV2组.体外、体内Luc检测均显示Ad-null显著增强AAV2对肿瘤的转导效率,荧光素信号分别为AAV2单独感染的28和4.5倍.Ad-null可提高肿瘤细胞内AAV2的mRNA水平,当Ad-null滴度为1、10 MOI时AAV2+Ad-null组的EGFP拷贝数明显高于AAV2组,而Ad-null对细胞内AAV2的DNA影响不大,AAV2+Ad-null组与AAV2组的EGFP拷贝数差别不大.结论 联合使用少量腺病毒可明显提高AAV对肿瘤细胞的转导效率,可能与其提高AAV转录水平有关,为今后应用AAV作为肿瘤基因治疗的载体提供了实验证据.