PRS-CTGF-SiRNA逆转录病毒载体及包装细胞株的构建

• 作者: 刘伏友 刘映红 刘虹 彭佑铭 段绍斌 肖力 肖平
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结缔组织生长因子 siRNA 逆转录病毒载体 包装细胞株 转染
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 547-550
• 页数: 4页
• 分类号: R349.62
• 字数: 2810字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.05.009

摘要

目的 用PRS逆转录病毒载体构建介导人结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(small interfering RNA,sRNA)表达的PRS-CTGF-SiRNA逆转录病毒载体,并建立高效、稳定表达CTGF-SiRNA的包装细胞株.方法 根据siRNA靶序列设计要求及PRS逆转录病毒载体特点分别设计含64bp DNA序列的4对寡核苷酸,并在体外合成.PRS载体用BglⅡ、HindⅢ双酶切完全后,分别与退火的4对寡核苷酸进行连接,构建成表达CTGF小分子干扰RNA的pRS-CTGF-SiRNA逆转录病毒载体.用脂质体2000介导转染PT67包装细胞,经抗性筛选,挑单克隆,扩大培养,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株.结果 经酶切、连接后构建成的质粒称之为PRS-CTGF-SiRNA1～4,经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变.经脂质体介导转染包装细胞、抗性筛选和NIH3T3测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度的细胞集落,扩大培养后建立CTGF-SiRNA高效表达的包装细胞株.结论 成功构建了能表达CTGFsiRNA的PRS-CTGF-SiRNA逆转录病毒载体,并建立了稳定、高效生产有活性的的CTGF-SiRNA产毒包装细胞株.