高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞

• 作者: 叶欣 崔志芳 邹玉红 闫华晓 韩秋霞
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 树突状细胞 高强度聚焦超声 肿瘤抗原 干扰素-γ
• 年，卷（期）: 2007,（33）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 6569-6572
• 页数: 4页
• 分类号: R730.23
• 字数: 6000字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.33.025

摘要

目的:探讨用高强度聚焦超声辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏树突状细胞的可行性,为高强度聚焦超声开辟新的应用领域.方法:实验于2004-01/2005-04在泰安市中心医院中心实验室完成.①实验材料:BALB/C清洁级小鼠20只.CT-26肿瘤细胞为BALB/C小鼠来源的结肠癌细胞,由解放军第二军医大学免疫学研究所惠赠.②实验方法:应用白细胞介素4+粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合诱导培养小鼠骨髓细胞.设立4组:高强度聚焦超声辐照组将CT-26细胞置于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中,进入对数生长期后调整细胞浓度为5×109 L-1,采用1 000 W/cm2×30 s剂量辐照CT-26细胞,离心,取上清过滤除菌.冻融组将CT-26细胞调整浓度至5×109 L-1,-80℃冷冻,35℃水浴复温,循环4次,裂解离心,取上清过滤除菌.单纯CT-26细胞组将CT-26细胞调整浓度至5×109 L-1,细胞不经其他任何处理.空白对照组将树突状细胞与抗原按1∶10接种,培养4～6 h.从小鼠脾脏制备脾细胞,分离纯化T细胞,调整浓度至2×109 L-1,T细胞与上述4组负载的树突状细胞按20∶1接种,培养基中加入白细胞介素2,共孵育48 h.③实验评估:对扩增培养的树突状细胞首先进行形态学观察,再采用流式细胞仪分析细胞表型.锥虫蓝染色观察高强度聚焦超声辐照后CT-26细胞拒染率和形态学变化.ELISA法检测各组致敏树突状细胞诱导T细胞分泌白细胞介素12及干扰素-γ的含量.结果:①骨髓源性树突状细胞形态及细胞表面表型分析:体外培养小鼠骨髓细胞6～8 d,细胞表面出现较多毛刺样突起,拉长,为典型的树突状细胞特征.流式细胞仪检测树突状细胞表面分子CD80、CD86、H-2Kd及I-Ad呈高表达.②高强度聚焦超声辐照后细胞拒染率和形态学的变化:超声辐照剂量为1 000W/cm2×30 s时,无细胞存活,完全失去细胞形态,全部被撕裂成碎片.③致敏树突状细胞诱导T细胞分泌细胞因子情况:与空白对照组比较,高强度聚焦超声辐照组、冻融组、单纯CT-26细胞组分泌的白细胞介素12及干扰素-γ含量均明显升高(P均＜0.05);且高强度聚焦超声辐照组、冻融组升高幅度大于单纯CT-26细胞组,但此两组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:高强度聚焦超声能使肿瘤细胞灭活、破碎,其制备的肿瘤抗原可体外致敏树突状细胞,并使树突状细胞分泌白细胞介素12,诱导T细胞分泌干扰素-γ.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶欣	泰安市中心医院肿瘤内科	29	264	9.0	15.0
2	韩秋霞	山东科技大学化工学院生物工程系	33	174	10.0	12.0
3	闫华晓	山东科技大学化工学院生物工程系	19	142	7.0	11.0
4	邹玉红	山东科技大学化工学院生物工程系	31	206	10.0	13.0
5	崔志芳	山东科技大学化工学院生物工程系	26	147	8.0	11.0