缺血再灌注后心肌细胞缝隙连接通讯改变与其凋亡及坏死的关系

• 作者: 于世龙 冯义柏 姜磊 曾玉杰 朱丹丹 李志远 李楠 柯元南 王勇
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌细胞凋亡 缝隙连接通讯 划痕标记染料示踪技术 卡维地洛 庚醇
• 年，卷（期）: 2007,（16）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3074-3077,3085
• 页数: 5页
• 分类号: R542.2
• 字数: 6466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.16.042

摘要

目的:了解不同缺血再灌注时间心肌细胞缝隙连接通讯改变情况,分析心肌细胞缝隙连接通讯与心肌细胞坏死、凋亡的关系以及卡维地洛、庚醇的干预作用.方法:实验于2004-10/2005-03在中日友好医院临床研究所完成.取培育7 d心肌细胞缺氧30 min后换用正常含糖的DMEM培养基培养1,2,3,6 h,造成再给氧损伤.给药方案:分为三组;未用药组,庚醇组,卡维地洛组.庚醇用DMEM(含5%的小牛血清)配成1,2 mmol/L的浓度,卡维地洛配成0.001 g/L的浓度,分别加入药物于受试细胞,培养细胞30 min后再做相关实验.未用药组不加药.采用细胞划痕技术,在倒置荧光显微镜下直观地观察不同组别、缺氧再灌注不同时间罗氏黄经过缝隙连接流通情况.利用流式细胞仪观察缺氧再灌注不同时间细胞凋亡情况.结果:①在缺氧30 min时心肌缝隙连接通讯明显下降,荧光仅传至划痕附近第二列细胞,正常细胞荧光则传至四列以外的细胞.再供氧1 h时恢复到第三列,以后逐步恢复到正常.运用庚醇后传导明显减慢荧光仅传至第二列细胞,缺氧和再供氧时传导也无明显变化.运用卡维地洛后传导改变不明显.②正常和缺血30 min时凋亡指数差异无显著性(P＞0.05),再供氧1 h凋亡指数为27.4%,与正常相比差异显著(P＜0.01).坏死的心肌细胞在再供氧2 h后差异有显著性(P＜0.01).运用卡维地洛、庚醇后凋亡指数在再灌注1 h时分别较未用药组减少了55.11%,21.53%.③培养7 d的心肌细胞搏动频率为(120±18)次/min,缺氧30 min时,搏动减弱,次数为(56±16)次/min,再供氧1 h时,搏动次数为(118±22)次/min,两者差异显著(P＜0.01).加入浓度为2 mmol/L的庚醇后,心肌细胞搏动明显减弱,约为(64±20)次/min,差异显著(P＜0.001).加入0.001 g/L卡维地洛搏动次数也有不同程度的减低(P＜0.05).在缺氧再灌注过程中,两个干预组搏动次数变化不大.结论:心肌细胞在缺氧时缝隙连接通透性减低,庚醇、卡维地洛也有不同程度的降低缝隙连接通讯的作用.庚醇、卡维地洛通过改变缝隙连接通讯以及其他方面的作用来减少心肌细胞的死亡和凋亡.