人胚胎干细胞培养及其cDNA文库的构建

• 作者: Angela M Eastham Peter L Stern 周素芳
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人胚胎干细胞 cDNA文库 分子克隆
• 年，卷（期）: 2007,（17）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2049-2053
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 4730字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.17.001

摘要

目的 构建人胚胎干细胞cDNA文库,为筛查疾病抗原基因奠定基础.方法 培养和收集人胚胎干细胞克隆,提取胚胎干细胞总RNA,分离纯化mRNA,利用mRNA作模板反转录合成双链cDNA,双链DNA经pfu-DNA聚合酶将链末端补平,与EcoRⅠ接头连接,XhoⅠ酶切消化产生粘端.用Sepharose CL2B柱分离纯化及除去小分子cDNA片段,与Uni-ZAP XR噬菌体连接,体外转化XL1-blue MRF菌,建成cDNA文库并计算重组效率.对cDNA文库进行扩增,测定扩增文库的滴度.阳性重组子用EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切鉴定插入片段的大小.结果 构建成含1.2×106重组子的人胚胎干细胞cDNA文库,重组子插入外源DNA片段长度不小于1000 kb.结论 已成功构建人胚胎干细胞cDNA文库,适合用于筛选目的基因克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周素芳	广西医科大学生物化学与分子生物学教研室	45	166	7.0	11.0