体外实验观察小分子干扰RNA对胶质瘤U251细胞血管内皮生长因子表达的影响

• 作者: 王佳佳 胡锦 董万利 金由辛
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 小分子干扰RNA 血管内皮生长因子 胶质瘤 基因治疗
• 年，卷（期）: 2007,（36）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 7219-7222
• 页数: 4页
• 分类号: R329.114
• 字数: 5132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.36.015

摘要

目的:血管内皮生长因子能促进血管内皮细胞增生和血管形成,而RNA干扰技术可高效特异地导致转录后基因沉默现象.实验针对人血管内皮生长因子基因化学合成小分子干扰RNA,观察其对胶质瘤U251细胞的体外干扰效应.方法:实验于2006-09/2007-02在中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室完成.①实验材料:人类U251胶质母细胞瘤细胞株由上海市肿瘤研究所朱景德教授惠赠.非特异性小分子干扰RNA,绿色荧光标记的FAM negative control siRNA(上海吉玛公司).②实验方法:选择基因序列号为NM0033761的血管内皮生长因子基因cDNA序列上的3个位点设计3条不同序列的小分子干扰RNA,并应用BLAST技术排除其他同源基因.采用脂质体法转染U251细胞,以200 hmol/L进行转染,以转染非特异性小分子干扰RNA作为阴性对照组,以未加入小分子干扰RNA作为空白对照组.48 h后RT-PCR筛选最佳小分子干扰RNA,将抑制率最高的小分子干扰RNA再分别按50,100,200,300 nmol/L进行转染.③实验评估:荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR法半定量检测浓度梯度下小分子干扰RNA对U251细胞血管内皮生长因子mRNA表达的抑制效果.结果:①荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率:镜下可见胞质内的绿色荧光,同一视野下细胞核呈蓝染,转染效率达95%以上.②RT-PCR检测血管内皮生长因子mRNA的表达水平:不同序列的小分子干扰RNA以200 nmol/L转染细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达水平均有所下调,以小分子干扰RNA1转染组最为明显(P＜0.01),抑制率大于70%,选为最佳特异性小分子干扰RNA.U251细胞转染50,100,200,300 nmol/L的小分子干扰RNA1 48 h后,随着转染浓度的升高,小分子干扰RNA1的抑制效果逐渐增强,各浓度转染组血管内皮生长因子mRNA的表达水平可下调16%～73%.结论:以血管内皮生长因子为靶基因、化学修饰合成的特异性小分子干扰RNA,在体外可有效抑制目的基因mRNA的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金由辛	中国科学院上海生物化学研究所	82	394	11.0	16.0
2	董万利	苏州大学附属第一医院神经内科	192	792	13.0	17.0
3	胡锦	上海交通大学第六人民医院神经外科	36	209	8.0	11.0
4	王佳佳	苏州大学附属第一医院神经内科	16	48	5.0	6.0