分离纯化牛嗜铬细胞方法改进

• 作者: 张晓慧 梁丰 王为 郭昕 雄鹰 马小军
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 肾上腺髓质/细胞学 嗜铬颗粒 细胞分离
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 2219-2222,2232
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5968字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.12.006

摘要

目的:建立一种稳定、经济、简单的牛肾上腺髓质嗜铬细胞体外分离、纯化方法,为临床移植提供充足、健康的细胞来源.方法:实验于2004-01/2005-12在中科院大连化学物理研究所生物医学材料工程组实验室完成.将胶原酶消化法和机械分离法结合,分离新生牛嗜铬细胞;采用Percoll非连续密度梯度离心法纯化新生牛嗜铬细胞.采用相差显微镜观察牛嗜铬细胞形态,椎虫蓝排斥染色观察牛嗜铬细胞活性,组织化学染色鉴定牛嗜铬细胞属性和纯度,免疫组化染色观察牛嗜铬细胞的功能活性.结果:①健康的牛嗜铬细胞集中在一定密度的两层分离介质之间,红细胞完全沉降于离心管底部,而皮质细胞和细胞碎屑则分散在特定密度的分离介质中.②平均每个牛肾上腺可分离得到(0.7～3.1)×108个牛嗜铬细胞.③将分离得到的牛嗜铬细胞进行椎虫蓝排斥染色,显示新鲜分离的牛嗜铬细胞存活率大于99%,具有合成儿茶酚胺的功能活性.结论:机械分离结合胶原酶灌注消化法分离牛嗜铬细胞后,经Percoll非连续等密度梯度离心可以有效纯化牛嗜铬细胞,分离的细胞数量多,纯度高,有合成儿茶酚胺的功能活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雄鹰	解放军第二一○医院神经内科	5	44	3.0	5.0
2	梁丰	解放军第二一○医院神经内科	3	27	2.0	3.0