建立大鼠骨髓源性树突状细胞体外扩增及纯化的方法

• 作者: 乔莉 刘顺利 王锦玲 石力 米文娟 苏钰 邱建华 陈福权
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 树突状细胞 超微结构 大鼠 骨髓
• 年，卷（期）: 2007,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 10049-10052
• 页数: 4页
• 分类号: R322.1
• 字数: 4476字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.50.022

摘要

目的:目前对树突状细胞的研究主要集中在人及小鼠系统,关于大鼠树突状细胞特性和功能的研究较少.体外扩增并纯化大鼠骨髓树突状细胞的方法,并对其进行形态学和免疫学鉴定.方法:实验于2004-06/2005-06在第四军医大学西京医院耳鼻喉科实验室完成.实验材料:8～12周龄雌性SD大鼠由第四军医大学实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.实验方法:①参考Oliver方法,利用黏附法诱导分离SD大鼠骨髓细胞,获得高纯度的树突状细胞.采用扫描电镜和透射电镜观察培养6,8,10,12 d与12 d加内毒素情况下细胞形态,并采用流式细胞仪鉴定.②无菌条件下取出大鼠脾脏加RPMI1640培养液研磨并通过不锈钢筛网,收集未贴壁细胞,以RPMI1640培养液冲洗出的细胞作为反应细胞.取96孔培养板加入反应细胞,并按照1:480,1:240,1:120,1:60比例加入刺激细胞.采用ELX800型酶联免疫检测仪测定波长为490 nm处吸光度值.结果:①随培养时间的增长,细胞逐渐成熟,培养12 d的细胞形态不规则,表面有大量树突状突起,培养12 d加内毒素的细胞进一步成熟,体积增大,高表达CD80、CD86分子.②随着培养时间和树突状细胞数目的增加,树突状细胞刺激T细胞增殖的能力逐渐增强,加入内毒素后这种能力进一步加强.结论:成功地建立了体外大量扩增大鼠骨髓树突状细胞方法,并可在培养过程中收获不同成熟状态树突状细胞.