人脐静脉间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增殖生长的关系

• 作者: 单伟 张海峰 李德华 秦书俭 赵宝东
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 人脐静脉 原代培养 换液频度 间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2007,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3864-3867
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.20.001

摘要

目的:体外分离培养人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞,观察采用不同的换液频度与细胞增殖和生长的关系.方法:实验于2006-03/11在辽宁医学院解剖学实验室完成.①选取正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带,由辽宁医学院附属第一医院提供,产妇及其家属均知情同意.②根据更换细胞培养液时间的不同,分为接种后每24 h,48 h,72 h更换培养液组.③无菌条件下将脐带用预热的磷酸盐缓冲液充分洗涤去血渍,从脐静脉一端插入留置针,用预热的磷酸盐缓冲液冲净静脉腔血,止血钳夹闭另一端,采用胶原酶消化法分离人脐静脉内皮及内皮下细胞,取消化30 min的细胞悬液进行贴壁培养,以1×108L-1密度接种于24孔培养板中,每孔的细胞数和培养液量相同,按实验设计分组的时间方法更换培养液.④各组自培养24 h开始,每天分别取各组细胞4孔,以噻唑蓝比色法测定生长曲线.并采用免疫细胞化学方法对分离的细胞进行表面抗原鉴定.结果:①间充质干细胞的形态学观察:原代培养1周,细胞以梭形细胞为主.传代培养2 h细胞开始贴壁变形,24 h基本完成贴壁,48 h可见部分已贴壁的细胞开始分裂增殖,细胞形态多样,呈椭圆形、梭形、三角形等.5～7 d贴壁细胞可见多核的成纤维细胞样.在细胞生长增生过程中,接种后每24 h更换培养液组细胞增殖明显,生长状态均最好;接种后每48 h更换培养液组次之;接种后每72 h更换培养液组细胞增殖较慢,细胞生长状态也较差.②生长曲线:接种后每24 h更换培养液组的细胞生长增殖较快,比接种后每48 h及72 h更换培养液组达到的同样细胞数平均提前2～3 d(P＜0.05);接种后每48 h及72 h更换培养液组之间差异无显著性意义(P＞0.05).③间充质干细胞表面抗原特性:免疫细胞化学分析显示CD166呈阳性,vWF呈阴性.结论:胶原酶消化法体外分离获得的人脐静脉内皮及内皮下细胞数量高、活性佳.更换培养液的频度不同,细胞的增殖生长过程和形态变化时间不同,接种后每24 h更换培养液更有利于间充质干细胞的增殖生长和纯化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦书俭	辽宁医学院解剖学教研室	98	432	10.0	14.0
2	单伟	辽宁医学院解剖学教研室	52	160	6.0	9.0
3	李德华	辽宁医学院解剖学教研室	59	244	9.0	13.0
4	赵宝东	辽宁医学院解剖学教研室	10	41	3.0	6.0
5	张海峰	辽宁医学院解剖学教研室	1	5	1.0	1.0