成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性

• 作者: 李志刚 毕薇薇 赵春明 郭巍 郭立斌
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 人骨髓间充质干细胞 培养 生物学特性
• 年，卷（期）: 2007,（28）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 5519-5522
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 4971字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.28.018

摘要

目的:观察成人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法及其生物学特性,为骨髓间充质干细胞的临床应用奠定技术基础.方法:实验于2005-12在吉林省四平市中心医院中心实验室进行.实验材料:人骨髓间充质干细胞,Ficoll淋巴细胞分离液,胎牛血清,牛血清白蛋白,α-MEM培养基,胰蛋白酶,FITC标记的CD44和CD90.实验方法:①人骨髓间充质干细胞的分离与培养:采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,条件培养基培养和扩增,倒置光学显微镜下观察细胞形态及生长情况.②人骨髓间充质干细胞生长曲线的测定:取生长良好的P1,P5,P10细胞,用胰酶消化,接种于24孔板培养,每天各取3孔消化计数细胞,取平均值,连续培养7 d,绘制生长曲线.③人骨髓间充质干细胞表面标志的测定:取生长良好P5细胞进行免疫荧光染色鉴定(CD44,CD90并设同型对照).④人骨髓间充质干细胞的冻存及复苏:收集生长良好细胞,计数细胞密度及冻前存活率.将细胞加入到细胞冻存液中液氮冷冻保存.30 d后复苏细胞,每日倒置光学显微镜下观察细胞生长状况.结果:①倒置显微镜下观察细胞形态:倒置显微镜下观察细胞呈纤维形,漩涡状生长.②人骨髓间充质干细胞的生长曲线分析:传代的细胞生长较原代要快,从第10代开始细胞生长开始出现缓慢征象.③细胞表面标记检测结果:免疫荧光染色后细胞膜着色明显,CD44,CD90阳性率均大于90%.④细胞冻存及复苏生长特性分析:椎虫蓝计数细胞存活率90%以上,增殖能力强,和未冻存过的传代细胞具有同样的生长特性.结论:应用密度梯度法分离法能获得较高纯度的骨髓间充质干细胞,能在体外长期培养,在传代培养5代内生长旺盛且生物学特性稳定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵春明	四平市中心医院中心实验室	16	75	5.0	8.0
2	郭立斌	四平市中心医院中心实验室	9	42	3.0	6.0
3	毕薇薇	四平市中心医院中心实验室	8	37	4.0	5.0
4	郭巍	四平市中心医院中心实验室	8	60	4.0	7.0
5	李志刚	四平市中心医院中心实验室	6	20	3.0	4.0