脑源性神经生长因子促进成年大鼠脑海马神经干细胞定向分化的浓度选择

• 作者: 佟雷 唐源远 季丽莉 王振宇 赵久红
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 大鼠海马 表皮生长因子 脑源性神经生长因子 分化
• 年，卷（期）: 2007,（46）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 9255-9258
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.46.011

摘要

目的:探讨培养基中表皮生长因子与血清两者浓度一定的条件下,不同浓度的脑源性神经生长因子对成年大鼠脑海马神经干细胞向神经元分化的影响.方法:实验于2007-08在中国医科大学神经解剖研究室完成.①材料:清洁级雄性成年SD大鼠1只,由中国医科大学实验动物部提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.实验过程中应用的表皮生长因子、脑源性神经生长因子均由R&D公司提供.②实验方法:无菌条件下分离大鼠脑海马组织,剪碎后胰蛋白酶消化,过滤、离心、弃上清,加入含2%B27、20 μg/L表皮生长因子、20 μg/L碱性成纤维生长因子的DMEM/F12无血清条件培养基体外培养神经干细胞,传至第4代时利用有限稀释法进行单克隆培养,100倍镜下克隆球直径约为200μm时制备单细胞悬液,稀释后滴加于96孔板内,设立两组,全量新鲜培养基组加入刚配置未使用过的DMEM/F12无血清培养基100μL,半量条件培养基组加入上述曾用于神经干细胞培养且含有其代谢产物的1/2 DMEM/F12无血清培养基100μL.③实验评估:观察神经干细胞的单克隆培养增殖情况.对克隆球行巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色.按培养基中脑源性神经生长因子终浓度的不同将所培养细胞设立0,50,100,150,200 μg/L组,各组均加入20μg/L表皮生长因子和体积分数为0.1的胎牛血清,1周后行神经元特异性烯醇化酶免疫细胞化学染色,检测神经干细胞向神经元分化情况.结果:①神经干细胞单克隆培养结果:单克隆培养开始时神经干细胞增殖缓慢,半量条件培养基组细胞增殖速度快于全量新鲜培养基组,随着细胞数的增多,两组细胞增殖速度也相应加快,分别在培养后第12天、第15天形成直径为200μm的克隆球.②神经干细胞免疫细胞化学染色结果:单克隆培养后克隆球表达巢蛋白,诱导分化后神经元特异性烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白均呈阳性表达.③各组神经干细胞分化为神经元的比例:与0 μg/L脑源性神经生长因子组比较,50,100 μg/L脑源性神经生长因子组的神经干细胞分化为神经元比例均明显增高(t=2.502～5.025,P＜0.05);而浓度为150,200 μg/L时均无明显变化(t=0.420～1.857,P＞0.05).结论:向含有B27、表皮生长因子、碱性成纤维生长因子的DMEM/F12条件培养基中加入20 μg/L表皮生长因子和体积分数为0.1胎牛血清的情况下,脑源性神经生长因子促使神经干细胞向神经元分化的较佳浓度为50 μg/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王振宇	中国医科大学基础医学院人体解剖学教研室	34	185	8.0	12.0
2	佟雷	中国医科大学基础医学院人体解剖学教研室	20	129	7.0	10.0
3	季丽莉	中国医科大学基础医学院人体解剖学教研室	18	90	5.0	9.0
4	唐源远	中国医科大学基础医学院人体解剖学教研室	7	32	4.0	5.0
5	赵久红	中国医科大学基础医学院人体解剖学教研室	6	30	4.0	5.0