摘要:
目的:观察氧化低密度脂蛋白对内皮细胞株304细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂1及6-酮-前列腺素F1α的影响.方法:实验于2005-06/12在解放军第三零五医院老年病中心实验室完成.内皮细胞株304细胞(由武汉中国生物典藏中心提供).①内皮细胞株304细胞加入DMEM培养基孵育培养,传代时以质量浓度为25 g/L的胰酶消化.显微镜下细胞呈鹅卵石样紧密排列,无重叠生长现象.②将未经修饰的低密度脂蛋白溶于0.15 μmol/L氯化钠溶液中,透析除去残余试剂,4℃条件下储存,以防脂蛋白氧化.③将内皮细胞株304细胞以3x104/孔细胞悬液接种到96孔板中,分为氧化低密度脂蛋白0,50,100,200 mg/L浓度组,每组重复3孔.细胞融合生长后换用含不同浓度的氧化低密度脂蛋白DMEM培养基,作用24 h,留取细胞上清液,检测纤溶酶原激活物抑制剂1及6-酮-前列腺素F1α的含量.④细胞悬液接种到96 孔板后,加入100 mg/L的氧化低密度脂蛋白,分别作用3,6,12,24 h,留取细胞上清液,测定纤溶酶原激活物抑制剂1及6-酮-前列腺素F1α含量,观察氧化低密度脂蛋白时间效应.以氧化低密度脂蛋白0 mg/L浓度组作为空白对照.结果:①氧化低密度脂蛋白对内皮细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂1及6-酮-前列腺素F1α含量的影响:与氧化低密度脂蛋白0 mg/L浓度组比较,氧化低密度脂蛋白50,100,200 mg/L浓度组纤溶酶原激活物抑制剂1的含量均明显升高[(180.1±2.5),(248.1±9.0),(278.6±15.6),(290.3±15.1)μg/L,P=0.000];6-酮-前列腺素F1α的含量均明显降低[(1 113.6±10.6),(995.0±8.8),(767 0±25.1),(660.9±20.3)ng/L,P=0.000].②氧化低密度脂蛋白对内皮细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂1的时间效应:氧化低密度脂蛋白100 mg/L浓度组作用3,6,12,24 h,各时间点纤溶酶原激活物抑制剂1的释放均明显高于氧化低密度脂蛋白0 mg/L浓度组(t=3.77~15.75,P<0.05).③氧化低密度脂蛋白对内皮细胞释放6-酮-前列腺素F1α的时间效应:与氧化低密度脂蛋白0 mg/L浓度组比较,作用3 h时氧化低密度脂蛋白100 mg/L浓度组明显升高(t=3.86,P=0.018),6 h时两组基本相似(t=2.13,P=0.100),12,24 h时均明显降低(t=16.21~21.76,P<0.001).结论:氧化低密度脂蛋白可促进内皮细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂1,抑制6-酮-前列腺素F1α的分泌,从而促使血管痉挛、血栓形成和动脉粥样硬化的发生发展.