脑微血管内皮细胞对体外缺氧神经干细胞增殖及凋亡的影响

• 作者: 朱晓峰 王银妹 金玉玲
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 缺氧 神经干细胞 鼠脑微血管内皮细胞 增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2007,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3882-3885
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.20.008

摘要

目的:观察脑微血管内皮细胞对体外培养缺氧神经干细胞增殖、凋亡的影响.方法:实验于1996-01/1996-12在佳木斯大学神经科学所完成.实验材料:同一基因背景新生的Wistar大鼠由哈尔滨医科大学实验动物学部提供(黑动字第99102001).实验方法:①取新生24 h Wistar大鼠大脑培养神经干细胞,采用免疫组织化学方法鉴定神经干细胞.②取出生1～7 d Wistar大鼠大脑培养脑微血管内皮细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定.③将培养传代纯化的脑微血管内皮细胞,用0.25%胰酶消化成单细胞液后接种于涂有多聚赖氨酸包被的盖玻片上,接种传3代后用胰酶消化的神经干细胞,以1:10接种比例加入神经细胞完全培养液共培养.④用无菌石蜡油覆盖于低糖细胞培养液表面,制备低氧低糖溶液.对照组:正常神经干细胞置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养.缺氧共培养组:取共培养3 d细胞,吸出培养液,用无菌Hank's缓冲液清洗2次,加入低氧低糖溶液共同作用2,4,8,16 h后换液,用PBS缓冲液冲洗3次后,换神经细胞完全培养液,置于细胞培养箱中复氧培养.缺氧单纯神经干细胞组:取传3代神经干细胞,用无菌Hank's缓冲液清洗2次后,方法同上.实验评估:免疫组织荧光鉴定缺氧条件下神经干细胞的增殖与凋亡.结果:①免疫组织化学方法检测Nestin及Ⅷ因子相关抗原分别鉴定为神经干细胞及脑微血管内皮细胞.②对照组细胞胞体饱满,折光性强,周围有光晕.缺氧单纯神经干细胞组细胞胞体肿胀,折光性差,有大量细胞碎屑,仅有少量活细胞,并出现悬浮死细胞.缺氧共培养组细胞形态有所改善,细胞折光性仍较好,大部分细胞突起仍未见回缩,仅少数细胞肿胀,坏死.③随着缺氧时间的延长,细胞死亡明显增多,存活数明显下降.缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组与对照组(321.76±22.20,180.00±17.89,255.33±10.33,P＜0.01).④缺氧条件下脑微血管内皮细胞对神经干细胞增殖及凋亡的影响:缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组,细胞凋亡细胞数低于缺氧单纯神经干细胞组(P＜0.05).结论:脑微血管内皮细胞可以促进缺氧神经干细胞的增殖、减少其凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱晓峰	佳木斯大学神经科学研究所	128	527	12.0	15.0
2	金玉玲	佳木斯大学神经科学研究所	46	162	7.0	10.0
3	王银妹	佳木斯大学神经科学研究所	3	3	1.0	1.0